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詳細介紹
平板克隆形成1基本原理
克隆形成試驗是測定細胞增殖能力的有效方法之一，貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量，可以反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。
所需材料· 細胞生長培養基
· 胎牛血清
· 胰蛋白酶
· PBS
· 青霉素-鏈霉素溶液（100X）
· 吉姆薩染液
3實驗步驟1.取對數生長期的各組細胞，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞，并把細胞懸浮在10%胎牛血清的細胞生長培養基中備用。
2.將細胞懸液作梯度倍數稀釋，每組細胞每皿分別接種100個細胞于含10ml 37℃預溫培養液的皿中，并輕輕轉動，使細胞分散均勻。
3.置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養箱中培養2～3周。
4.當培養皿中出現肉眼可見的克隆時，終止培養。棄去上清液，用PBS小心浸洗2次。
5.加純甲醇或1:3醋酸/甲醇5ml，固定15分鐘。
6.去固定液，加適量Giemsa應用染色液染10～30分鐘
7.用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。
8.將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片，用肉眼直接計數克隆，或在顯微鏡（低倍鏡）計數大于10個細胞的克隆數。后計算克隆形成率。
克隆形成率=（克隆數/接種細胞數）×100%
9.平板克隆形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好，不能有細胞團，接種密度不能過大。
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