細胞實驗之成年小鼠關節軟骨細胞原代培養步驟

原代培養是指直接從組織或器官中分離出細胞進行培養的方法，它能夠保持細胞的原始特性。

以下是根據最新信息進行細胞實驗之成年小鼠關節軟骨細胞原代培養的步驟：

  1. 動物處死和組織采集：

    1.1 使用C57小鼠，年齡在8-10周之間。通過頸椎脫位處死后，使用75%乙醇進行消毒，并在無菌條件下操作。

    1.2 從小鼠體內分離大腿腿骨，去除筋膜、肌肉和結締組織，以獲取關節軟骨組織。

  2. 軟骨組織的處理：

    2.1 將軟骨組織 制成小于1mm3的小塊，并使用含有2%雙抗的PBS進行清洗。

    2.2 使用剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，并加入預熱的Collagenase D進行消化。

  3. 消化和細胞分離：

    3.1 將含有軟骨碎片的管放入37℃、80rpm的搖床中進行消化，第一次消化時間為2小時。

    3.2 消化結束后，使用含血清的培養基終止消化，并通過40μm細胞篩過濾，離心收集細胞。

    3.3 對未消化的組織進行第二次消化，同樣使用預熱的Collagenase D，消化時間也為2小時，然后收集細胞。

   4. 細胞培養：

    4.1 將收集的細胞用DMEMwanquan培養基重懸，計數后種植在24孔板中。

    4.2 培養24小時后更換新鮮的wanquan培養基，繼續培養。

       在進行原代培養時，需要特別注意無菌操作，以避免細胞污染。此外，培養條件（如溫度、CO2濃度和培養基的成分）對細胞的生長和存活至關重要。在實驗

過程中，應嚴格遵守實驗室的安全規程和操作指南。