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cKO小鼠是通過時空特異性基因敲除技術，在特定組織、細胞類型或發育階段選擇性失活目標基因的模型。其核心在于克服傳統KO（全身性敲除）的胚胎致死問題，實現基因功能的精準解析。
| 組件 | 功能 | 技術演進 |
|---|---|---|
| loxP位點 | 34bp回文序列，被Cre重組酶識別 | 通過同源重組或CRISPR插入目標基因兩側 |
| Cre重組酶 | 介導loxP間DNA片段切除或反轉 | 組織特異性啟動子（如Alb-肝臟、Nes-神經元）控制表達 |
| 誘導型系統 | 化學/光控激活Cre（如Tamoxifen誘導Cre-ERT2） | 實現時間可控敲除（Hayashi & McMahon, 2002） |
關鍵流程：
構建flox小鼠（Flanked by loxP）：目標基因關鍵外顯子兩側插入loxP位點，未激活時基因功能正常。
與Cre工具鼠雜交：Cre在特定組織表達后切除floxed基因片段，實現條件性敲除。
| 挑戰 | 傳統限制 | 前沿突破 |
|---|---|---|
| 長片段敲除效率低 | 片段>5kb時陽性率驟降 | 藥康生物長片段技術（支持23Mb片段編輯） |
| Cre表達滲漏 | 非特異性重組致背景敲除 | Tet-On/Cre-ERT2系統精準誘導 |
| 多基因協同調控難 | 單一基因操作局限 | CRISPR-Cas12a聯用實現多基因條件敲除 |
| 特性 | 傳統KO小鼠 | cKO小鼠 |
|---|---|---|
| 基因缺失范圍 | 全身性 | 組織/時間特異性 |
| 胚胎致死規避 | 不可 | 可（如胚胎必需基因） |
| 研究焦點 | 基因全局功能 | 時空特異性機制（如遲發性病理） |
| 應用案例 | Lep-KO（肥胖模型） | 神經元特異性Tau敲除（阿爾茨海默病） |
案例：DNA聚合酶β（Polβ）全身KO致胚胎死亡，但T細胞特異性cKO揭示其在免疫應答中的功能（Gu et al., 1994）。
神經科學：多巴胺受體Drd2在神經元cKO后，揭示其調控小膠質細胞激活的途徑。
腫瘤免疫：PD-1在T細胞中條件敲除，驗證免疫檢查點阻斷療法的細胞特異性毒性。
誘導型系統：Tamoxifen激活Cre-ERT2，在成年小鼠中敲除Alzheimer相關基因App，模擬遲發性神經退行。
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