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非同源末端連接實(shí)驗(yàn)(NHEJ) 是細(xì)胞修復(fù)DNA雙鏈斷裂(DSBs)的核心途徑,其核心特征為無需同源模板,直接重新連接斷裂的DNA末端。
同源重組實(shí)驗(yàn)是一種依賴DNA序列相似性(同源臂)的精準(zhǔn)基因編輯技術(shù),通過外源載體與宿主基因組間的序列交換實(shí)現(xiàn)靶向修飾。
原核注射實(shí)驗(yàn)是一種將外源DNA直接注入受精卵原核(通常為雄原核)中的轉(zhuǎn)基因技術(shù),用于制備轉(zhuǎn)基因動物模型。注射后,外源基因可隨機(jī)整合到宿主基因組中,并在后續(xù)發(fā)育中穩(wěn)定遺傳。該方法操作簡便、效率較高,是構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠等模式生物的常用手段,廣泛應(yīng)用于基因功能研究、疾病模型建立及藥物開發(fā)等領(lǐng)域。
慢病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是一種利用改造后的慢病毒載體將外源基因穩(wěn)定導(dǎo)入宿主細(xì)胞的技術(shù)。慢病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒,具有感染分裂和非分裂細(xì)胞的能力,能將目的基因整合到宿主基因組中,實(shí)現(xiàn)長期穩(wěn)定表達(dá)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因功能研究、基因治療和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)的制備等領(lǐng)域。
基因沉默實(shí)驗(yàn)是指細(xì)胞內(nèi)特定基因的表達(dá)被抑制或關(guān)閉的現(xiàn)象,通常發(fā)生在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平。常見的機(jī)制包括DNA甲基化、組蛋白修飾以及RNA干擾(如siRNA和miRNA介導(dǎo)的mRNA降解或翻譯抑制)。基因沉默在調(diào)控基因表達(dá)、維持基因組穩(wěn)定性、細(xì)胞分化以及防御病毒等方面具有重要作用,同時也與某些疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
CRISPR/Cas12b系統(tǒng)實(shí)驗(yàn):CRISPR/Cas12b(原稱 C2c1)屬于 Class 2 Type V-B 型 CRISPR 系統(tǒng),是繼 Cas9 和 Cas12a 后的重要基因編輯工具。
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